Vseprohouby.cz

Příprava agarových médií a jejich rozdělení

1️⃣ Rozdělení agarových médií

Agarová média se používají pro izolaci a kultivaci hub. Dá se je rozdělit podle hlavního cukerného zdroje:

Typ média	Hlavní složky	Použití
PDA (Potato Dextrose Agar)	Bramborový odvar + dextroza + agar	Standard pro většinu saprofytických hub, rychlý růst mycelia, vhodný první klon z tkáně nebo pro restart
MEA (Malt Extract Agar)	Maltový extrakt + agar	Silný růst a bohatá výživa, vhodné pro houby náročnější na stopové látky
CCA (Cornmeal Agar / brambor + kukuřičný sirup)	Bramborový odvar + kukuřičný sirup + agar	Kombinace dostupnosti a čirosti média, vhodné pro práci doma
DA (Dextrose Agar)	Dextroza + agar	Čiré médium, snadná kontrola kontaminace, méně komplexní výživa

2️⃣ Základní principy přípravy

Sterilizace – vše musí být sterilní. Používáme autokláv nebo tlakový hrnec (121 °C, 15–20 min).

pH – většina hub preferuje 5.5–6.5.

Aseptická práce – laminární box je nutný pro plnění Petri misek a inokulaci.

Agarová konzistence – standardně 15–20 g/l (1,5–2 %) agar; pokud je příliš řídký, mycelium roste pomaleji, příliš tuhý agar zpomalí kolonii.

3️⃣ Jednoduché recepty

A. PDA – klasika

200 g brambor (oloupané, na kostky)
1 l demineral. vody → vařit 30 min, scedit
20 g dextrozy
15–20 g agaru

Postup:
Připrav odvar z brambor a scedit.
Přidej dextrozu a agar, rozmíchej.
Sterilizuj v autoklávu 15–20 min.
Po vychladnutí (~50 °C) nalij do Petriho misek v laminárním boxu.

B. MEA – maltový extrakt

30 g maltového extraktu
15–20 g agaru
1 l demineral. vody

Postup: stejný jako u PDA. Vhodné pro houby náročné na živiny.

C. Brambor + kukuřičný sirup (CCA)

75 g brambor
1 l demineral. vody (odvar)
10–15 g kukuřičného sirupu
15 g agaru

Výhody: médium je čiré, rychle roste, vhodné pro domácí práci.

D. Dextrose agar (čiré)

20 g dextrozy
15–20 g agaru
1 l demineral. vody

Výhody: nejvíce průhledné, skvělé pro vizuální kontrolu kontaminace, méně výživné, vhodné pro rychlé testy.

4️⃣ Pracovní postup

Sterilní plnění Petriho misek

Pracuješ v laminárním boxu.

Petriho misky nejlépe jednorázové sterilní, nástroje (lžíce, pinzety, skalpely) sterilizuj/čisti alkoholem, ideálně však plamenem. Alkohol je jen dezinfekte, ne sterilizace!

Nalij agar teplý (~50 °C) do misek, zakryj víkem, nech ztuhnout. Nejlépe v proudu vzduchu laminárního boxu. Před vyjmutím z boxu zajistit parafilmovou páskou! Na ruce dezinfekci!

Uchovávej v lednici a temnu do inokulace.

Inokulace mycelia

Použij sterilní nástroje (např. skalpel nebo inokulační jehlu i jednorázová injekční jehla může být).

Přenášej malý kousek mycelia z čisté zdravé kultury.

Přikryj misku a označ, datum a druh.

Inkubuj při vhodné teplotě (většinou 20–25 °C).

Tipy

Vyhnout se tzv. přetížení Petriho misek – lepší menší množství mycelia, aby nedošlo ke kontaminaci.
Pokud médium ztmavne nebo je cítit zápach, pravděpodobně za to může kontaminace – misku vyhodit.
Lepší menší série médií a častěji, než velké množství naráz – snazší kontrola.