Agar - agar 1000 - 100g

1000 udává gelovou pevnost 1000g / cm²

Pro Agar - agar 1000 se běžně používá koncentrace:

• 1,5–2 % pro pevné média v Petriho miskách pro laboratorní kultivaci.

• To znamená: 15–20 g agar prášku na 1 litr vody nebo výživného média.

• Nižší koncentrace (1–1,5 %) vytvoří měkčí gel.

• Vyšší koncentrace (2 %) poskytne pevnější gel vhodný pro dlouhodobou kultivaci a pomalejší prorůstání.

• Agar se musí zcela rozpustit při ohřevu a sterilizovat (autokláv nebo tlaková napařovací sterilizace) před nalitím do Petriho misek.

Příprava agarových médií pro houby – jednoduchý průvodce

1️⃣ Rozdělení agarových médií

Agarová média se používají pro izolaci a kultivaci hub. Dá se je rozdělit podle hlavního cukerného zdroje:

2️⃣ Základní principy přípravy

1. Sterilizace – vše musí být sterilní. Používáme autokláv nebo tlakový hrnec (121 °C, 15–20 min).

2. pH – většina hub preferuje 5.5–6.5.

3. Aseptická práce – laminární box je nutný pro plnění Petri misek a inokulaci.

4. Agarová konzistence – standardně 15–20 g/l (1,5–2 %) agar; pokud je příliš řídký, mycelium roste pomaleji, příliš tuhý agar zpomalí kolonii.

3️⃣ Jednoduché recepty

A. PDA – klasika

• 200 g brambor (oloupané, na kostky)

• 1 l demineral. vody → vařit 30 min, scedit

• 20 g dextrozy

• 15–20 g agaru

Postup:

1. Připrav odvar z brambor a scedit.

2. Přidej dextrozu a agar, rozmíchej.

3. Sterilizuj v autoklávu 15–20 min.

4. Po vychladnutí (~50 °C) nalij do Petriho misek v laminárním boxu.

B. MEA – maltový extrakt

• 30 g maltového extraktu

• 15–20 g agaru

• 1 l demineral. vody

Postup: stejný jako u PDA. Vhodné pro houby náročné na živiny.

C. Brambor + kukuřičný sirup (CCA)

• 75 g brambor

• 1 l demineral. vody (odvar)

• 10–15 g kukuřičného sirupu

• 15 g agaru

Výhody: médium je čiré, rychle roste, vhodné pro domácí práci.

D. Dextrose agar (čiré)

• 20 g dextrozy

• 15–20 g agaru

• 1 l demineral. vody

Výhody: nejvíce průhledné, skvělé pro vizuální kontrolu kontaminace, méně výživné, vhodné pro rychlé testy.

4️⃣ Pracovní postup

Sterilní plnění Petriho misek

1. Pracuješ v laminárním boxu.

2. Petriho misky nejlépe jednorázové sterilní, nástroje (lžíce, pinzety, skalpely) sterilizuj/čisti alkoholem, ideálně však plamenem. Alkohol je jen dezinfekte, ne sterilizace!

3. Nalij agar teplý (~50 °C) do misek, zakryj víkem, nech ztuhnout. Nejlépe v proudu vzduchu laminárního boxu. Před vyjmutím z boxu zajistit parafilmovou páskou! Na ruce dezinfekci!

4. Uchovávej v lednici a temnu do inokulace.

Inokulace mycelia

1. Použij sterilní nástroje (např. skalpel nebo inokulační jehlu i jednorázová injekční jehla může být).

2. Přenášej malý kousek mycelia z čisté zdravé kultury.

3. Přikryj misku a označ, datum a druh.

4. Inkubuj při vhodné teplotě (většinou 20–25 °C).

Tipy

• Vyhnout se tzv. přetížení Petriho misek – lepší menší množství mycelia, aby nedošlo ke kontaminaci.

• Pokud médium ztmavne nebo je cítit zápach, pravděpodobně za to může kontaminace – misku vyhodit.

• Lepší menší série médií a častěji, než velké množství naráz – snazší kontrola.